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人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231的傳代步驟是怎樣的?

更新更新時(shí)間:2023-06-25 瀏覽次數(shù):7507

  人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231是一種人乳腺癌細(xì)胞系,常用于腫瘤轉(zhuǎn)移和侵襲性的研究。該細(xì)胞系來源于一個(gè)四級(jí)侵襲性乳腺癌患者的異種移植物,在體內(nèi)形成了高度轉(zhuǎn)移和惡性侵襲的表現(xiàn)。
 
  通常在無菌環(huán)境中使用層流罩。培養(yǎng)基的更換與細(xì)胞的生長(zhǎng)速度密切相關(guān)。如果在6-16小時(shí)內(nèi)更換培養(yǎng)基,可以去除殘留的亞甲基楓樹和死細(xì)胞??捎糜谶M(jìn)一步科學(xué)研究,不能用于治療等方面。
  血清的類型和質(zhì)量會(huì)對(duì)人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231的生長(zhǎng)產(chǎn)生影響。血清是細(xì)胞培養(yǎng)非常重要的營(yíng)養(yǎng)來源。錯(cuò)誤使用血清會(huì)使細(xì)胞無法存活。細(xì)胞無法存活的另一個(gè)原因是培養(yǎng)基。每個(gè)細(xì)胞系都有其特定的用途和適應(yīng)的細(xì)胞培養(yǎng)基。如果突然使用不同培養(yǎng)條件的培養(yǎng)基,大多數(shù)細(xì)胞不能立即適應(yīng)。
 
  1、用75%酒精噴灑整個(gè)培養(yǎng)瓶消毒,將其平躺置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行1-3小時(shí)的緩沖,然后置于無菌操作臺(tái),打開瓶口,將其中的培養(yǎng)液去掉,再往其中加入5-6mL新鮮培養(yǎng)基(以T25培養(yǎng)瓶為例)并置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀況及培養(yǎng)基顏色變化對(duì)其進(jìn)行換液以及傳代,一般2到3天換一次液;
  2、待細(xì)胞長(zhǎng)滿瓶底面積80%-90%,需要對(duì)其進(jìn)行傳代,傳代比例為1:3到1:6;
  3、人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231傳代步驟:將0.25%胰酶-0.53mMEDTA消化液置于37°預(yù)熱,倒掉培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,往培養(yǎng)瓶中加入3-5mlPBS,輕晃洗滌后棄去。往瓶中加1-2ml預(yù)熱好的胰酶,置于37°孵育消化(第一次消化需時(shí)常取出置于顯微鏡下觀察,以顯微鏡下細(xì)胞觸角回收變圓、輕拍瓶壁見細(xì)胞脫落為最佳消化時(shí)間,記錄最佳消化時(shí)間,以便于下次消化),消化好后加入3ml培養(yǎng)基終止消化。用移液槍輕輕吹打瓶壁上的細(xì)胞,使之*脫落,然后收集細(xì)胞懸液,1200rpm離心3min,棄上清,加入*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,進(jìn)行傳代。
 
  MDA-MB-231細(xì)胞具有以下特征:
  高度轉(zhuǎn)移能力:該細(xì)胞系可以從原位腫瘤進(jìn)入血液或淋巴管道,并在機(jī)體其他部位進(jìn)行遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移;
  低黏附性:這類腫瘤細(xì)胞容易在無血清培養(yǎng)條件下暴發(fā)式擴(kuò)張,并不容易貼壁死亡;
  快速增殖:MDA-MB-231生長(zhǎng)快、分裂率高,呈纖錐型或多角形;
  藥物耐受性強(qiáng):經(jīng)過多次化學(xué)治療后,部分患者可能出現(xiàn)藥物耐受情況。
  缺少ERα雌激素受體表達(dá),即是TNBC(三陰)(Triple-negative breast cancer)之一。

人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231

 

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